Forsøk og praktisk arbeid

Utstryk av bakterier på agarskål

Pionerene innen mikrobiologien prøvde å finne de beste vekstforholdene for ulike mikroorganismer. Robert Koch (1843-1910) prøvde først å dyrke bakterier på avkuttede poteter med blandet suksess, etter hvert gikk han over til løsninger med kjøttekstrakt og fordøyde proteiner som var nærmere næringstilgangen i kroppen. Ved å tilsette gelatin dannet mediet gelé og bakteriene fløt ikke lenger fritt rundt, men satt fast på overflaten. Uheldigvis ble gelatinen ofte nedbrutt av bakteriene og den smeltet allerede ved 28°C. Koch hadde en assistent, Walther Hesse (1846-1911), som klagde til sine kone, Angelina Fannie Eilshemius Hesse (1850-1934), over problemet. Hun hadde brukt agar i matlaging og foreslo å bruke dette. Julius Richard Petri (1852-1921), også en assistent i Kochs laboratorium, tok i bruk en flat skål til å ha mediet i, petriskålen. Siden har agar i petriskål vært en suksess i mikrobiologien.

Svi av bakterieløkken i gassflammen, la den kjølne. Plukk opp en koloni fra agarskålen med bakterieløkken eller dypp forsiktig i bakteriekultur.
Stryk ut på ny agarskål ved å bevege bakterieløkken fram og tilbake på overflaten langs den ene siden av skålen.
Bakteriene skal fordeles videre. Svi av bakterieløkken på nytt, la den avkjøle. Drei agarskålen 90°, og stryk bakteriene fra det første utstryket ved å bevege nålen att og fram på en ny del av agarskålen.
Gjenta punkt 3. Sett lokket på skålen og merk undersiden med gruppe og dato. Inkuberes ved 37 °C over natt.

Faglig forklaring

Når agaren er tilsatt de nødvendige næringsstoffene, vil det være et godt vekstmedium for bakterier. I tillegg vil den faste overflaten gjøre at bakteriene sitter fast og ikke flyter rundt. Bakterier vokser og deler seg ved enkel todeling. Under gunstige forhold vil de kunne vokse eksponentielt (fordobler seg ved hver nye celledeling). Ved høy tetthet av bakterier på overflaten av agaren vil hele skålen dekkes med et jevnt «teppe». Hvis vi derimot fordeler bakteriene fint utover, vil vi etter hvert se kolonier, «prikker» med bakterier, hvor bakteriene i hver koloni stammer fra en enkelt bakterie. Ved gjentatte utstryk av bakteriene på ulike deler av overflaten, ved hjelp av en bakterieløkke, skilles bakteriene fra hverandre og gir opphav til enkelt kolonier.

Materialer og utstyr

Agarskål med bakteriekolonier eller bakteriekultur
Agarskåler
Bakterieløkke/inokuleringsøse
Gassbrenner
Inkubator/varmeskap 30ºC