naturfag.no blir utvikla av Nasjonalt senter for naturfag i opplæringa
Kontakt oss: post@naturfag.no Ansvarleg redaktør: Merethe Frøyland
Personvernerklæring
Besøk oss på:
Gelelektroforese
En beskrivelse av metoden, støping av agarosegel og gjennomføring av elektroforese.
Om metoden
Gelelektroforese er en basisteknikk innen genteknologi. Ved gelelektroforese kan store molekyler som DNA-molekyler eller proteiner skilles fra hverandre etter størrelse i en gel. Det er et sentralt verktøy i rettsmedisin, ved gentesting og ved kartlegging av hvor restriksjonsenzymer kutter gener (dvs. kartlegging av såkalte restriksjonsseter).
Ved gelelektroforese av DNA kan vi bruke en gel som er laget av agarose. I gelen er det porer som DNA-bitene vandrer gjennom når det settes strøm på gelen. DNA er negativt ladet så det vil vandre fra negativ til positiv pol i gelen. Porene er en hindring for store DNA-biter slik at DNA-et vandrer gjennom gelen med ulik hastighet avhengig av hvor stort det er. Når gelelektroforesen er ferdig, farges gelen med et fargestoff som binder seg til DNA -et slik at DNA-bitene blirsynlige og danner et mønster.
Etter en gelelektroforese kan dere finne størrelsen på DNA-bitene ved å lage standardkurve basert på DNA-størrelsesmarkører.
Støping av agarosegel
- Sett opp støpekaret, pass på at det er tett.
- Bland agarosepulveret med buffer i en flaske som tåler sterk varme (flasker eller erlenmeyerkolber i pyrexglass fungerer fint).
- Varm opp i mikrobølgeovn til det koker.
- Gjenta dette 2-3 ganger til alt pulveret er løst.
- Hell agaroseløsningen i støpekaret.
- Sett i kammen(e).
- Ta ut kammen(e) når gelen er stivnet.
Selve elektroforesen
- Preparer prøvene og tilsett loadingbuffer til både prøvene og DNA-størrelsesmarkøren.
- Plasser gelen i elektroforesekaret slik at brønnene er ved negativ pol.
- Hell buffer i elektroforesekaret slik at den går ca. 0,5 cm over gelen.
- Last prøvene og DNA-størrelsesmarkør i hver sine brønner i gelen.
- Kjør gelen ved 100 V i ca. 30 minutter.
- Følg med hvordan loadingbufferen vandrer.
- Stopp gelen før fargefronten har vandret ut av gelen.
- Legg gelen i fargeløsning enten i sterkt konsentrert løsning i noen minutter eller i svak fargeløsning i noen minutter.
- Avfarg gelen ved å vaske i fra springen flere ganger dersom dere har farget i sterk fargeløsning.
- Analyser resultatet.
- Finn størrelsen på DNA-bitene i gelen (se egen prosedyre, lenke til høyre).
Aktuelle kompetansemål i læreplanen
Læreplan i biologi - programfag i studiespesialiserende utdanningsprogram
- Biologi 2
- Bioteknologi
- gjere greie for framstilling av genetiske fingeravtrykk, og korleis dei kan brukast i rettsmedisin og i studium av slektskap mellom individ og grupper av organismar
- Bioteknologi
Læreplan i teknologi og forskningslære - programfag i studiespesialiserende utdanningsprogram
- Teknologi og forskningslære X
- Teknologi, naturvitenskap og samfunn
- beskrive prinsipper og virkemåte for noen moderne instrumenter i industri, helsevesen eller forskning, og gjøre rede for nytten og eventuelle skadevirkninger
- Teknologi, naturvitenskap og samfunn
- Teknologi og forskningslære 1
- Teknologi, naturvitenskap og samfunn
- beskrive prinsipper og virkemåte for noen moderne instrumenter i industri, helsevesen eller forskning, og gjøre rede for nytten og eventuelle skadevirkninger
- Teknologi, naturvitenskap og samfunn