Gelelektroforese

En beskrivelse av metoden, støping av agarosegel og gjennomføring av elektroforese.

Om metoden

Gelelektroforese er en basisteknikk innen genteknologi. Ved gelelektroforese kan store molekyler som DNA-molekyler eller proteiner skilles fra hverandre etter størrelse i en gel. Det er et sentralt verktøy i rettsmedisin, ved gentesting og ved kartlegging av hvor restriksjonsenzymer kutter gener (dvs. kartlegging av såkalte restriksjonsseter).

Ved gelelektroforese av DNA kan vi bruke en gel som er laget av agarose. I gelen er det porer som DNA-bitene vandrer gjennom når det settes strøm på gelen. DNA er negativt ladet så det vil vandre fra negativ til positiv pol i gelen. Porene er en hindring for store DNA-biter slik at DNA-et vandrer gjennom gelen med ulik hastighet avhengig av hvor stort det er. Når gelelektroforesen er ferdig, farges gelen med et fargestoff som binder seg til DNA -et slik at DNA-bitene blirsynlige og danner et mønster.

Etter en gelelektroforese kan dere finne størrelsen på DNA-bitene ved å lage standardkurve basert på DNA-størrelsesmarkører.

Støping av agarosegel

  1. Sett opp støpekaret, pass på at det er tett.
  2. Bland agarosepulveret med buffer i en flaske som tåler sterk varme (flasker eller erlenmeyerkolber i pyrexglass fungerer fint).
  3. Varm opp i mikrobølgeovn til det koker.
  4. Gjenta dette 2-3 ganger til alt pulveret er løst.
  5. Hell agaroseløsningen i støpekaret.
  6. Sett i kammen(e).
  7. Ta ut kammen(e) når gelen er stivnet.

Selve elektroforesen

  1. Preparer prøvene og tilsett loadingbuffer til både prøvene og DNA-størrelsesmarkøren.
  2. Plasser gelen i elektroforesekaret slik at brønnene er ved negativ pol.
  3. Hell buffer i elektroforesekaret slik at den går ca. 0,5 cm over gelen.
  4. Last prøvene og DNA-størrelsesmarkør i hver sine brønner i gelen.
  5. Kjør gelen ved 100 V i ca. 30 minutter.
  6. Følg med hvordan loadingbufferen vandrer.
  7. Stopp gelen før fargefronten har vandret ut av gelen.
  8. Legg gelen i fargeløsning enten i sterkt konsentrert løsning i noen minutter eller i svak fargeløsning i noen minutter.
  9. Avfarg gelen ved å vaske i fra springen flere ganger dersom dere har farget i sterk fargeløsning.
  10. Analyser resultatet.
  11. Finn størrelsen på DNA-bitene i gelen (se egen prosedyre, lenke til høyre).

Læreplan i biologi - programfag i studiespesialiserende utdanningsprogram

  • Biologi 2
    • Bioteknologi
      • gjere greie for framstilling av genetiske fingeravtrykk, og korleis dei kan brukast i rettsmedisin og i studium av slektskap mellom individ og grupper av organismar

Læreplan i teknologi og forskningslære - programfag i studiespesialiserende utdanningsprogram

  • Teknologi og forskningslære X
    • Teknologi, naturvitenskap og samfunn
      • beskrive prinsipper og virkemåte for noen moderne instrumenter i industri, helsevesen eller forskning, og gjøre rede for nytten og eventuelle skadevirkninger
  • Teknologi og forskningslære 1
    • Teknologi, naturvitenskap og samfunn
      • beskrive prinsipper og virkemåte for noen moderne instrumenter i industri, helsevesen eller forskning, og gjøre rede for nytten og eventuelle skadevirkninger