Forsøk og praktisk arbeid

Tillaging av agarskåler

Agar er et polysakkarid som utvinnes fra alger, og som kan kjøpes i form av pulver. Agar løser seg i kokende vann og stivner til en gelé når temperaturen kommer ned mot 40°C.

Tilsett 20 g LB Agar til 500 ml destilert/kokt vann. Dekk åpningen av flaska med papir. Varm løsningen til alt er oppløst og løsningen er klar. Hvis du bruker mikrobølgeovn kan det gjøres slik: Varm opp til kokepunkt (800 W, ca 2 min i mikrobølgeovn). Ta ut flasken med en gryteklut, miks forsiktig, gjenta oppvarming til agaren er helt oppløst. Da skal løsningen bli klar og uten synlige partikler ved å rotere på flasken. Hvis du ikke har ferdig LB-agar kan du veie opp 5 g druesukker, 1 g gjærekstrakt og 4 g agar i en 500 ml kolbe og tilsette 250 ml vann. Følg ellers anvisningen som ovenfor.
Sett kolben til avkjøling ved romtemperatur. Drei flaska forsiktig av og til for å blande innholdet. Når temperaturen er litt under 50°C, og du så vidt kan holde rundt flaska, fyller du agaren i de sterile plast petriskålene.
Sett 10 sterile petriskåler etter hverandre på bordet med lokket på. Fjern papiret og la flaskehalsen passere et par ganger gjennom en flamme for å drepe eventuelle mikroorganismer på flaskehalsen. Ta av lokket på petriskålen med en hånd og hold det i skråstilling over bunnen, mens du fyller bunnen omkring 2/3 fullt med den flytende agaren.
Legg lokket forsiktig på og la petriskålene stå helt i ro i omkring 10 minutter til agaren er stivnet.
Det kan dannes kondensvann på innsiden av lokket. For å unngå at kondensvannet renner ned i agaren, oppbevares skålene med bunnen i været. Hvis du legger skålene i en plastpose på et kjølig sted, kan de holde seg i mange uker uten at de tørker inn.

Kommentarer/praktiske tips

Næringsagar (LB-agar) er en agar som er tilsatt ulike næringsstoffer. Denne rike næringsagaren kan vi få kjøpt ferdigblandet, men vi kan også lage den selv ved å tilsette for eksempel druesukker (glukose) og gjærekstrakt til ren agar. I begge tilfellene får vi et rikt næringsmedium som mange mikroorganismer kan vokse på. Koker vi næringsagaren i trykkoker eller autoklav ved 120°C i 20 minutter, blir alle levende celler drept, og vi sier at næringsagaren er steril. Oppvarming til kokepunktet tre ganger i mikrobølgeovn kan erstatte bruk av autoklav, selv om agaren ikke blir steril. Det er mulig å bruke næringsagaren om igjen etter at den har stivnet, ved for eksempel å varme den opp i mikrobølgeovn.

Materialer og utstyr

500-1000 ml glasskolbe
Gassbrenner
Sterile petriskåler av plast
Papir
20 g LB agar (Bio-rad katalognr. 166-0600EDU)
(Eller: agar, druesukker (glukose), gjærekstrakt)